Pada akhir penyertaan pada 15 Mac 2007, 204 persatuan bola sepak telah memasuki pertandingan awal: 203 daripada 207 ahli FIFA pada masa itu (termasuk negara tuan rumah, Afrika Selatan, sebagai prosedur kelayakan di Afrika juga bertindak sebagai kelayakan untuk Piala Negara-Negara Afrika 2010) dan pasukan Montenegro, yang kemudiannya menjadi ahli 208 FIFA. Bilangan akhir pasukan memasuki dan memecah rekod sebelum ini 199 peserta ditetapkan semasa Piala Dunia FIFA 2002. Empat ahli FIFA (semua dari AFC) tidak mendaftar untuk kejohanan ini semasa 15 Mac 2007: Bhutan, Brunei, Laos, dan Filipina.[1]

Selepas penutupan penyertaan, Bhutan telah dibenarkan masuk dan dimasukkan dalam cabutan awal Asia, manakala Brunei dan Filipina lewat menyertai dan penyertaan mereka ditolak.[petikan diperlukan]

Walau bagaimanapun, lima pasukan menarik diri ketika kelayakan tanpa bermain perlawanan: Bhutan, Republik Afrika Tengah, Eritrea, Guam dan São Tomé dan Príncipe. Di samping itu, Papua New Guinea gagal memenuhi tarikh akhir pendaftaran untuk Sukan Pasifik Selatan (yang juga peringkat awal kelayakan Oceania) dan tidak boleh mengambil bahagian dalam kelayakan.